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SUMMARY:Physics-Biology interface seminar : Karen Perronet - Amphi BLANDIN 
 du LPS de la Faculté des Sciences d’Orsay (Bâtiment 510) - 17 Mai 13 1
 4:00
DESCRIPTION:Cinétique de traduction de ribosomes individuels par microscop
 e de fluorescence\nKaren Perronet (Laboratoire Charles Fabry\, Institut d'
 Optique) \n \nLe ribosome est le moteur moléculaire traduisant le code 
 génétique de l’ARNm en protéine. La dynamique de ce processus asynchr
 one primordial est encore mal connue\, surtout chez les eucaryotes. Pouvoi
 r suivre des ribosomes individuels pendant la traduction est donc un enjeu
  important.\nNous présentons dans ce séminaire différentes stratégies 
 permettant d’étudier la vitesse d’élongation de ribosomes individuel
 s par microscopie de fluorescence en réflexion totale.\nNous avons tout d
 ’abord utilisé des ribosomes procaryotes mutants que nous avons marqué
 s avec un nano-cristal semi-conducteur fluorescent. Nous avons ainsi pu me
 surer la vitesse globale de traduction d’une protéine.\nNous avons ensu
 ite hybridé des oligonucléotides fluorescents sur l’ARNm\, les départ
 s des marqueurs signalant alors le passage des ribosomes à leurs emplacem
 ents. Nous avons alors utilisé des ribosomes eucaryotes\, encore très pe
 u étudiés à l’échelle de la molécule unique. Les ribosomes sont ini
 tialement immobilisés sur l’ARNm grâce à une IRES\, structure seconda
 ire spécifique permettant une initiation non canonique du ribosome. Puis 
 suite à l’injection d’un système de traduction in-vitro\, ils peuven
 t traduire la protéine et atteindre les oligonucléotides marqués\, qu
 ’ils détachent grâce à leur activité hélicase. Ces dissociations se
  traduisent par une disparition du signal de fluorescence des marqueurs qu
 i diffusent hors de l’onde évanescente. Nous avons ainsi pu observer la
  distribution des durées de traduction jusqu’à des endroits spécifiqu
 es de l’ARNm. Nous avons pu extraire deux durées caractéristiques pour
  l’élongation. La première (typ. 40 s) est associée au premier cycle 
 d’élongation\, ralentie par le fait que le ribosome doit s’extraire d
 e l’IRES. La seconde (~1s) correspond à un cycle d’élongation normal
 .
LOCATION:Amphi BLANDIN du LPS de la Faculté des Sciences d’Orsay (Bâtim
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